检验检测

6．6  油性维生素A脂肪酸酯

Vitamin A Fatty Acid Ester in oil

本品是从水产动物的新鲜肝脏、幽门垂等得到的脂肪油的维生素A浓缩物的脂肪酸酯，或将维生素A脂肪酸酯溶在食用植物油中，1g含300mg以上维生素A，含标记量的90~120%维生素A①，维生素A300mg相当100万I.U.②。

1．性状

本品为无色~带淡黄色的油脂状，稍有特异臭气③。

2．鉴定试验

（1）将本品50mg溶于1mL氯仿中，调制成含10I.U.维生素A，取1mL，加三氯化铵试液5mL，呈现蓝色，并立即消退④。

（2）将本品50mg溶于维生素A测定，用异丙醇中调溶液1mL约含10I.U.，此液的波长327±1nm处有最大吸收峰⑤.

3.纯度试验

（1）游离酸  取本品2g，按香料的常规试验法的酸值测定法进行。但0.1mol/L氢氧化钾溶液的消耗量应在0.7mL以下⑥。

（2）乙醇型维生素A  把本品100mg溶在石油醚中，调成1mL含100~200 I.U.，做检液。然后在石油醚中把悬浊的氧化铝做成高约5cm的氧化铝层。通常将氧化铝层浸在石油醚中制成吸附管。在氧化铝层上部挂一小片脱脂棉，其中加入石油醚10mL，石油醚以1min落下30滴的速度缓慢吸入石油醚的液面在氧化铝层上面约1cm时，在吸附管内加5~10mL检液。检液的液面在氧化铝层上面约1cm时，用含5%乙醚的石油醚，以同样速度把酯型维生素A流出后，用同样方法用含有50%乙醚的石油醚收集流出的醇型维生素A。用波长350nm的紫外线箴期照射观察酯型维生素A及醇型维生素A的吸附层中的移动及流出。如吸附层裂开或产生气体，重新操作。本操作在常温下进行。得到的醇型维生素A溶液，通氮气或二氧化碳在约70℃水浴 蒸发除去石油醚，把残留物立即溶在异丙醇中，调整1mL含10国际单位后，在波长310nm，325nm及334nm处测定吸光度，根据下式求出醇型维生素A的含量，其量应在10%以下⑦。

式中  a——前面操作得到的吸光度，从定量法得的醇型维生素A的单位：

      b——从定量法得到的总维生素A的单位。在这里石油醚，乙醚，氧化铝及异丙醇都是用于测定维A的。

4．定量法

精确称取本品约0.5g，放在100mL的三角烧瓶中，加乙醇30mL及50%氢氧化钾溶液3mL，水浴加热30min。在流水中冷却后，用水30mL移到分液漏斗中，用10mL水洗烧瓶，洗液加到分液漏斗中。再用乙醚50mL洗烧瓶，把乙醚洗液加到分液漏斗中。再用乙醚50mL洗烧瓶，把乙醚洗液加到分液漏斗中充分混合振荡后静置。然后，把水层移到另外分液漏斗中，每次用乙醚50mL洗二次，把乙醚抽提液合在最初的乙醚抽提液中，把它用50mL水洗，反复操作直到水层加酚酞试液不显色为止。静置片刻，完全除去水层以后，把乙醚抽提液移到250mL的褐色茄形烧瓶中，每次用10mL乙醚抽提液通入氮气或二氧化碳，在约40℃水浴上把乙醚蒸发除去后，残留物立刻溶在异丙醇中，调整其1mL约含10I.U.作为检液。检液在波长310nm、325nm及334nm处测定吸光度，根据下式求出本品1g中的维生素A的含量。所用的乙醚及异丙醇是作为维A测定用。

本品1g中的维生素A（mg）= 325nm×0549⑧。

式中  A——在各波长处的吸光度；

      V——检液的量（mL）；

      l——液层的长度（cm）；

      f——校正系数（0.970~1.030的情况为1）；

     W——采取的检样量。

保存标准：放到遮光密封容器中用氮气置换空气保存存⑨。

注  解

①JPIX中醋酸松香油、棕榈酸松香油是95~105%。

②维生素A的I.U.表示生物学的效力，所以国际上规定0.344μg all-trans-维生素A₁醋酸酯定为1I.U.，1I.U.相当all-trans-维生素A1乙醇0.3μg、all-trans-β-胡萝卜素0.6μg。

③一般色调浅的是淡黄色的，通常是油状，在冬天或低温贮藏时有固形物析出。有由维生素A和食用植物油带来的特殊臭气，无不快感。不快感的臭气主要是由于氧化、变质、使维生素A破坏并妨害了食品的风味，不适于添加在食品中。

④适用于Car-pricl反应的呈色反应。维生素A与三氯化锑作用呈现特有的蓝色，显色的λmax是620nm。易呈色，但不稳定，容易退色。聚烯类也有此反应，脱水，不脱水、脱氢维生素A，β-胡萝卜素等胡萝卜素类物质也表示类似的呈色。检液中维生素A浓度有规定，如果与规定浓度差距太大给显色鉴定反应带来困难。

⑤本品是油性维生素A脂肪酸酯类的混合物，所以规定λmax为327±1nm。吸光度醋酸维生素A₁λmax：326nm， ：1，550（乙醇）1，535（异内醇）；棕榈酸维生素A₁λmax：325~328nm， ：975（乙醇）；维生素A₁醇λmax：325nm ：1，835（乙醇，异丙醇，）。氧化变质或维生素E等存在对λmax有影响。

⑥将酸值规定为1.96以下。酸值高主要是由食用植物油带来的。所以希望得到品质好的。

⑦因制造时酯化不充分引起的，所以定量法是利用铝柱层色谱法。

⑧本法用重量求出维生素A的量，如用1，830代替式中的换算系数0.549，用国际单位数求出。

⑨本品与维生素A及溶剂的食用植物油都易氧化，在空气中自动氧化，遇光易分解变质，所以规定了保存标准。