检验检测

3.8  5’-尿苷酸钠

Sodium 5’-Uridilate

      分子式C₉H₁₁N₂Na₂O₉P                                                     分子量368.15

本品定量时含尿苷-5’磷酸二钠（C₉H₁₁N₂Na₂O₉P）97~102%①。

1．性状

本品为无色~白色的结晶或者结晶性粉末，略有特殊味②。

2．鉴定试验

（1）将本品20mg溶于0.01mol/L盐酸定容至100mL，取10mL，加0.01mol/L盐酸至100mL，其液在262±2nm处有最大吸收区③。

（2）取本品的水溶液（3→10，000）3mL，加盐酸1mL和溴试液1mL，在水溶上加热30min后，注入空气，除去溴后再加二羟基甲苯乙醇溶液（1→10）0.2mL，然后加硫酸铁铵盐酸试液3mL，在水溶上加热20min呈绿色④。

（3）取本品的水溶液（1→20）5mL，加镁试液2mL，不生成沉淀，然后加硝酸7mL煮沸10min后，加氢氧化钠试液，中和后的液体呈磷酸盐的常规鉴定试验反应⑤。

（4）本品呈钠盐的常规鉴定试验反应。

3．纯度试验

（1）溶解性  将本品0.5g溶于10mL水中，无色，其浊度应接近透明⑥。

（2）酸碱性  本品的水溶液（1→20）的pH值用玻璃电极法测定，应是7.0~8.5。

（3）铵盐  将本品0.1g装入小试管中，添加氧化镁50mg和水1mL，在试管内悬挂用水润湿的红色石蕊试纸，将口盖好，在水溶上加热5min，试纸不变蓝⑦。

（4）砷  将本品1g溶于5mL水中，以此为检液进行砷试验时，应符合要求⑧。

（5）重金属  取本品1g，加稀醋酸2mL和水20mL，溶解，以此为检液进行重金属试验时，其量应在0.001%以下⑨。

（6）氨基酸  取本品的水溶液（1→1，000）5mL，加茚三酮试液1mL，加热3min时，不呈色⑩。

（7）吸光度比  本品的0.01mol/L盐酸溶液（1→50，000）在波长250nm、260nm及280nm处，测吸光度A1、A2和A3时，应是A1/A2=0.7~0.8，A3/A2是0.34~0.42 。

（8）其他核酸分解物  将本品的水溶液（1→10）和乙二醇单甲醚的混合液（2：1：2）作为展开溶剂进行薄层层析时，只能确认一个斑点。但薄板用作为担体的微晶纤维素，是在60~80℃干燥20min后之物，展开溶剂的前端上升至比原线高10cm时，停止展开，风干后，在暗处紫外线（波长约250nm）下观察，不用对照液 。

4．水分

精确称取本品约500mg，进行水分定量时，其量应在26%以下。但是，需将试样装入干燥滴定瓶中，加费歇尔滴定法用试剂甲醇10mL，密封，放置1h后，加一定量的费歇尔试剂使其约过剩10mL，密封，搅拌5min后，边搅拌边用水-甲醇标准溶液滴定。另外，用同样的方法进行空白试验 。

5．定量法

精确称取本品500mg，溶于0.01mol/L盐酸至1，000mL，取10mL，加0.01mol/L盐酸至250mL，作为检液，用0.01mol/L盐酸为对照液，在液层厚1cm，波长260nm处测定检液的吸光度A，依据下式求出尿苷-5’-磷酸二钠的含量 。

注  解

①制品纯度当在99%以上，但由于用吸光度测定法定量，考虑仪器误差等，取下限值为97%，上限值为102%。

②本品约溶于2.5mL水中，难溶于甲醇，几乎不溶于乙醇。

③构成本品的尿密啶有紫外部吸收，可利用进行鉴定。

④是对与尿密啶结合，构成本品的核糖的鉴定，用溴使核糖游离后利用二羟基甲苯反应而鉴定。

⑤首先加镁试液，确认游离的磷酸盐不存在后，再与硝酸共同煮沸，加水分解，使磷酸盐游离，确认有机磷的存在。

⑥在精制过程中，可能有蛋白质及其它杂质残存，对此要进行试验。

⑦限制铵盐的混入，NH₄的限量是0.02%。

⑧在生产的最后阶段用氢氧化钠中和，可是在氢氧化钠中常常存在砷、所以限制了它的混入量，AS₂O₃的限量为1ppm。

⑨在制造时，由设备、容器等带入限量是10ppm。

⑩制造时混入、或者制成成品后混入，所以设此规定。

限制肌芏酸、鸟苷酸、胞苷酸等亲缘化合物的混入，亲缘化合物的波长比如下表所示：

在制造的同时生成的其它核酸，在精制阶段被除去，但还残存一部分。这些虽然在卫生上是无害的，为了确保质量而设定规格。在本法中进行薄层层析时鉴定限量，作为尿苷酸和其它核酸Rf值的一例如下表所示：

从上表可以看出，尿苷、尿嘧啶互相分离是困难的，可是尿苷酸和其它物质的分离是较容易的。

用费歇尔逆滴定法进行。因为难溶于费歇尔滴定法用甲醇液中，所以要密封并放置1h。此时密封要十分注意，不要吸湿。本品有6分子的结晶水，其理论量是22.7%。另外，还有吸附水分，水量应在20%以下。

作为本品的定量法，有定量磷、氮或者核糖等方法，但是利用尿嘧啶测定紫外部吸收的方法较简单，重要性很好，一般都使用。0.01mol/L盐酸溶液的分子吸光系数是9,900，以此为标准可求出含量。