检验检测

3．7  5’-核糖核苷酸钠

Sodium 5’-Ribonucleotide

本品是肌苷-5’-磷酸二钠，鸟苷-5’-磷酸二钠，尿苷5’-磷酸二钠及胞苷-5’-磷酸二钠的混合物，定量时含5-’核糖核苷酸钠90%以上，这些5’-核糖核苷酸钠约85%以上是6-羟基嘌呤-5’-核糖核苷酸钠。

1．性状

本品为白色~类白色的结晶或粉末、无臭、有特殊的味道①。

2．鉴定试验

（1）取本品的水溶液（1→2，000）1mL，加5-甲基苯二酚乙醇溶液（1→10）0.2mL，然后再加硫酸铁铵盐溶液（1→1，000）3mL，在水浴上加热10min后呈绿色②。

（2）取本品的水溶液（1→20）5mL，加镁试液2mL，不生成沉淀，但加硝酸7mL，煮沸10min后，加氢氧化钠试液中和的溶液，呈磷酸盐的常规鉴定试验反应③。

（3）取本品的水溶液（1→1，000）1mL，加稀盐酸2mL及锌粉0.1g，在水浴上加热10min后，过滤，滤液在冰水中冷却，然后加亚硫酸钠溶液（3→1，000）1mL混合，放置10min后，再加氨基磺酸铵溶液（1→200）1mL，充分混合放置5min。然后再加N-1-萘基乙二胺四醋酸二盐酸盐溶液（1→500）1mL，呈紫红色④。

（4）取本品的水溶液（1→5，000）1mL，加稀盐酸1mL，在水浴中加热10min后冷却，加福林氏试液0.5mL及碳酸钠饱和溶液2mL呈蓝色⑤。

（5）取盐酸羧胺溶液（7→50）50mL，加氢氧化钠试液调pH值约6.5。取此液10mL，加本品0.5g，在水浴中加热2h后，取此液1mL，在水浴上蒸发至干。将此残留物溶于10mL水中，冰水冷却，加氨基磺酸的稀盐酸溶液（1→100）2mL，充分混合，徐徐滴加亚硝酸钠溶液（1→4）1mL，放置10min后，加氢氧化钠溶液（2→5）2mL呈金红色⑥。

（6）本品的水溶液（1→10），呈钠盐的常规鉴定试验反应。

3．纯度试验

（1）酸碱性  本品的水溶液（1→20）的pH值，用玻璃电极法测定时，应是7.0~8.5。

（2）砷  将本品0.5g溶于5mL水，以此为检液进行砷的常规试验时，应符合要求。

（3）重金属  将本品1g装入坩锅中，用硫酸铵1g覆盖，再加水0.5mL，静置加热炭化，不发生白烟后，再进一步强热灰化，徐徐加硫酸、硝酸各3滴，加热灰化后，冷却，在残留物中加稀醋酸2mL及水定容至50mL，如有必要可进行过滤。再加硫化钠试液2滴后充分混合，放置5min时，溶液颜色，不应在硫酸铵1g加铅标冷溶液2mL、稀醋酸2mL及水定容至50mL，再加硫化钠试液2滴，充分混合，放置5min后的溶液颜色深。

4．水分

精确称取本品500mg，根据水分定量法（费歇尔滴定法）的（2）逆滴定进行试验时，其量应在27%以下。但是，需将试样装入干燥滴定用量瓶中，加费歇尔滴定用的甲醇10mL，加费歇尔试液使一定量之过量约10mL，密封后，充分混合20min，边激烈振荡。边用水。甲醇标准溶液滴定。另外用同样方法进行空白试验⑦。

5．定量法

从下述（1）（2）及（3）得到的I、G及P的值中，可根据下式求出5’-核糖核苷酸钠及6-羟基嘌呤-5’-核糖核苷酸钠的含量。

（1）肌苷-5’-磷酸二钠  精确地称取本品约650mg，溶于水中定容至500mL，为A液。取A液1mL，加6mol/L盐酸4mL及水定容至10mL，在水浴上加热40min，冷后，加锌粉0.4g，时时激烈振荡，放置50min，加水定容至20mL，用滤纸滤过。取滤液10mL，加6mol/L盐酸1mL，用冰水边冷却边加亚硝酸钠溶液（3→1，000）1mL，充分混合后，放置10min，然后加氨基磺酸铵溶液，（1→200）1mL，混合振荡后，放置5min。然后再加N-1-萘基乙二胺二盐酸盐溶液（1→500）1mL，充分混合后在常温下放置15min，加水定容至20mL作为检液。

另外，取水1mL代替A液，以下以从A液制作检液的同样操作，制作对照液，以此为对照，于波长515nm处求出检液的吸光度⑧。

将5’-肌苷酸钠及5’-鸟苷酸钠3mg分别溶解于0.01mol/L盐酸100mL中，以0.01mol/L盐酸为对照液，分别测出其吸光度。但此时对5’-肌苷酸钠可使用250nm、5’-鸟苷酸钠可使用260nm的波长。

根据此时得到的吸光度，可以求得分子吸光系数E及EC，再根据下式可以分别求出其含量⑨。

分别精确地称取二者，使各自含量约为50mg的对应量、二者合并后溶于水定容至200mL，为B液。分别取B液1mL，2mL、3mL加6mol/L盐酸4mL及水分别定容至10mL，用这些与从A液制做检液同样操作，制做标准溶液，于波长515nm处分别测定其吸光度并画邮标准曲线。这种场合的对照液，是使用测定检液的吸光度时所用的对照液。

据此得到的标准曲线和检液的吸光率，可求出检液中所含的肌苷-5’-磷酸二钠的含量I（%）。

（2）鸟苷-5’-磷酸二钠  取（1）的A液1mL加2mol/L盐酸4mL及水定容至10mL，在水浴上加热30min，冷却后添加福林氏试液2mL及碳酸钠溶液(4-5)5mL，放置15mui后，加水定容至50mL，如有必要可进行离心，此上清液即为检液⑩。

另外，代替A液可取水1mL，以下与从A液制做检液所用的同样方法制做对照液，以此为对照，求出波长750nm处检液的吸光度。

分别取（1）的B液1mL、2mL及3mL，各加2mol/L盐酸4mL及水10mL，用这些与从A液制做检液所用的同样方法制做标准液，分别测定在波长750nm处的吸光度，画出标准曲线。此时作为对照液，使用的是测定检液的吸光度所用的对照液。

根据在此得到的标准曲线和检液的吸光度，可求出检液中所含的鸟苷-5’-磷酸二钠的含量G（%）。

（3）胞苷-5’-磷酸二钠及尿苷-5’-磷酸二钠  精确地称取本品约1.5g，溶于水定容至50mL为C液。取C液1mL，加肼（水合物）2mL于水浴上加热1h，冷却，加1mol/L盐酸，使成弱酸性，然后加0.01mol/L盐酸定容至100mL。取其液10mL，加0.01mol/L盐酸定容至100mL作为检液 。

另外可以代替C液，取水1mL，以下与从C液制作检液所用的同样操作制做对照液，以此为对照，求出在波长260nm及280nm处检液的吸光度A₂₆₀和A₂₈₀。

另外，取C液1Ml，加0.01mol/L盐酸定容至100mL，取10mL，加0.01mol/L盐酸定容至100mL。

就此液，以0.01mol/L盐酸为对照，求出波长260nm及280nm的吸光度A₂₆₀及A₂₈₀，根据下式可求出胞苷-5’-磷酸二钠及尿苷-5’-磷酸二钠的含量P（%） 。

注  解

①本品有很强的鲜味，与L-谷氨酸钠有相乘作用。

②是对核糖的鉴定。由于应用的是戊糖的呈色反应，所以高铁离子能增加敏感度。

③是对有机磷酸的鉴定。用镁试液证明不是无机磷酸，然后用醋酸加水分解，将生成的磷酸利用与钼酸铵沉淀反应加以鉴定。

④是对肌苷酸的鉴定。用稀盐酸加水分解，生成的次黄嘌啶，用锌粉分解，生成氨基咪唑。此物由于普拉顿，费歇尔反应，生成紫红色的偶氮色素。

⑤是对鸟苷酸的鉴定。由于加水分解生成鸟苷嘌呤，在碳酸钠溶液中，利用福林氏试液呈蓝色。

⑥是对胞苷酸及尿苷酸的鉴定。这些与羟基加热，生成C-异哑唑酮它与偶氮苯磺酸反应，在碱性条件下呈金红色。

⑦本品由于难溶于有机溶剂，充分混合后，进行滴定。

⑧肌苷酸的定量是利用组分碱基次黄嘌呤的比色法进行。生成色不比的吸收在λmax515±5nm处，分子吸光系数大约是15,500，呈色后30min内是稳定的。

⑨调制比色法所用标准溶液时用的5’-肌芏酸钠（5’-IMPNa）及5’-鸟苷酸钠（5’-GMPNa）的定量法。12，160是IMP（250nm）的分子吸光系数，11，800是GMP（260nm）的分子吸光系数。

⑩鸟苷酸的定量也是利用碱基的呈色反应。此呈色在λmax750nm处，分子吸光系数约为15,500，并稳定。

尿苷酸、胞苷酸与肼加热分解，利用其UV吸收的减少，进行定量。

5’-CMPNa及5’-vmPNa用肼处理智不处理的吸光度（Ph2），分别如下：